Статус документа
Статус документа

MP 3.1.0129-18

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

3.1. ПРОФИЛАКТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ

ПОРЯДОК ОРГАНИЗАЦИИ И ПРОВЕДЕНИЯ ИНДИКАЦИИ ПАТОГЕННЫХ БИОЛОГИЧЕСКИХ АГЕНТОВ, В ТОМ ЧИСЛЕ НЕУСТАНОВЛЕННОГО СИСТЕМАТИЧЕСКОГО ПОЛОЖЕНИЯ

1. Разработаны:

Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: Ежлова Е.Б., Демина Ю.В., Пакскина Н.Д., Омариев З.М.; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Российский научно-исследовательский противочумный институт "Микроб" Роспотребнадзора: И.Н.Шарова, Е.С.Казакова, С.А.Щербакова, Т.Ю.Красовская, В.Е.Куклев, С.А.Портенко, Н.А.Осина, А.С.Абдрашитова, И.А.Касьян, И.Г.Карнаухов, О.В.Кедрова, В.В.Кутырев; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: А.Н.Куличенко, О.В.Малецкая, А.Г.Рязанова, А.С.Волынкина; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Ростовский-на-Дону научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: С.В.Титова, О.С.Чемисова, Э.А.Москвитина, Л.Л.Трухачев, Н.В.Павлович, С.О.Водопьянов, А.С.Водопьянов, А.Б.Мазрухо, Р.В.Писанов; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Иркутский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: С.В.Балахонов, О.Д.Захлебная, Л.В.Миронова, А.К.Носков, М.Ю.Шестопалов; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: Ткаченко Е.А., Храпова Н.П., Захарова И.Б., Лемасова Л.В., Кузютина Ю.А., Маркин A.M., Шаров Т.Н., Шпак И.М., Викторов Д.В., Топорков А.В.; Федеральным бюджетным учреждением науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека: Дятлов И.А., Храмов М.В., Тюрин Е.А., Чекан Л.В., Богун Г.А., Кисличкина А.А.; Федеральным бюджетным учреждением науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор": Максютов Р.А., Пьянков О.В., Боднев С.А., Золин В.В., Оськина О.П., Терновой В.А., Гаврилова Е.В., Агафонов А.П.; Федеральным казенным учреждением здравоохранения "Противочумный центр" Роспотребнадзора: Лопатин А.А., Иванова С.М., Безсмертный В.Е.; Федеральным бюджетным учреждением здравоохранения "Федеральный Центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора: В.Ю.Ананьев. В.В.Мордвинова

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека - Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю.Поповой 31 мая 2018 г.

3. Введены впервые

I. Область применения

1.1. Настоящие методические рекомендации определяют порядок организации индикации патогенных биологических агентов, в том числе неустановленного систематического положения (неизвестного ПБА), в Центрах индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности и обеспечения противоэпидемической готовности на базе противочумных учреждений (далее - Центр индикации), Опорных баз Центров индикации возбудителей инфекционных болезней I-II групп патогенности ФБУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии" в субъектах Российской Федерации (далее - Опорная база Центра индикации) и лабораториях мобильного комплекса специализированной противоэпидемической бригады (далее - МК СПЭБ) Роспотребнадзора, функционирующих на базе ФКУЗ "Противочумный институт" Роспотребнадзора.

1.2. Методические рекомендации определяют основные принципы индикации и лабораторной диагностики инфекционных болезней с тяжелым клиническим течением и (или) неясной клинической картиной, возбудителями которых могут быть в том числе и микроорганизмы неустановленного систематического положения (новые, ранее не известные, атипичные), схему лабораторной диагностики, номенклатуру и объем исследований, требования биологической безопасности при проведении работ.

1.3. Методические рекомендации предназначены для специалистов органов и учреждений Роспотребнадзора, научных и медицинских организаций.

II. Общие положения

2.1. Задачи и функции Центра индикации определены приказом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 01.12.2017 N 1116 "О совершенствовании системы мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации", задачи и функции СПЭБ определены приказом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 24.03.2015 N 231 "О деятельности специализированных противоэпидемических бригад, сформированных на базе противочумных институтов Роспотребнадзора".

Установление этиологических факторов опасных инфекционных болезней бактериальной, вирусной, микотической и риккетсиозной природы, болезней с тяжелым клиническим течением и (или) неясной клинической картиной, возбудителями которых могут быть микроорганизмы неустановленного систематического положения, а также индикация ПБА в случае преднамеренного применения может осуществляется в лабораториях Центра индикации, Опорных баз Центра индикации и МК СПЭБ.

2.2. Для выявления и дифференциации этиологических факторов болезни используют подходы, изложенные в методических указаниях "Порядок эпидемиологической и лабораторной диагностики особо опасных, "новых" и "возвращающихся" инфекционных болезней".

Наличие одной из известных инфекционных болезней можно заподозрить на основании проведения клинико-эпидемиологической диагностики, алгоритм которой изложен в вышеуказанном методическом документе. Если предварительный диагноз поставить не удается, то проводится исследование материала на наличие ПБА неустановленного систематического положения. Поскольку в этом случае при проведении лабораторного исследования необходимо исключение всех известных на текущий момент возбудителей инфекционных болезней, то используют синдромный подход, предложенный ВОЗ (Руководство по сбору клинических образцов во время полевых расследований вспышек. WHO/CDS/CSR/EDC/2000.4).

Основными клиническими синдромами болезней являются: синдром острой диареи, синдром острой геморрагической лихорадки, острый желтушный синдром, острый неврологический синдром, острый респираторный синдром, острый дерматологический синдром, острый офтальмологический синдром, острый "системный" синдром. Для каждого из вышеуказанных острых синдромов существует перечень инфекционных болезней различной этиологии, для которых данный синдром может являться ведущим. В то же время, многие инфекционные болезни имеют не одну, а несколько клинических форм, каждая из которых характеризуется определенным синдромом. Наличие у больного одного из вышеуказанных синдромов при отсутствии известных предрасполагающих факторов служит основанием для проведения лабораторного исследования с целью подтверждения или исключения, прежде всего, возбудителей известных инфекционных болезней, которые характеризуются данным синдромом.

В случае отрицательных результатов лабораторных исследований на известные возбудители, требуется дальнейшее проведение исследований с целью выявления ПБА неустановленного систематического положения.

III. Порядок организации и проведения работ в лабораториях Центров индикации, Опорных баз Центров индикации и лабораториях МК СПЭБ

3.1. Номенклатура и объем исследований

3.1.1. В лабораториях Центров индикации осуществляют индикацию возбудителей опасных инфекционных болезней бактериальной, вирусной, паразитарной, микотической и риккетсиозной природы I-IV групп патогенности, выделение и идентификацию культур микроорганизмов возбудителей инфекционных болезней бактериальной природы I-IV групп патогенности и вирусной природы II-IV групп патогенности для решения следующих задач:

- установления этиологического фактора инфекционного заболевания в целях предупреждения или ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций, предупреждения завоза и распространения опасных инфекционных болезней на территории субъектов Российской Федерации;

- установления этиологического фактора опасных инфекционных болезней бактериальной и вирусной природы с тяжелым клиническим течением и (или) неясной клинической картиной, возбудителями которых могут быть микроорганизмы неустановленного систематического положения.

3.1.2. В лабораториях Опорных баз Центров индикации, а также лабораториях МК СПЭБ специалисты противочумных учреждений осуществляют индикацию возбудителей опасных инфекционных болезней бактериальной, вирусной, паразитарной, микотической и риккетсиозной природы I-IV групп патогенности, для установления этиологического фактора инфекционного заболевания в целях предупреждения или ликвидации последствий чрезвычайных ситуаций, предупреждения завоза и распространения опасных инфекционных болезней на территории субъектов Российской Федерации.

3.1.3. Для выделения вирусов I-II группы патогенности, специалисты Центра индикации, Опорной базы Центра индикации или СПЭБ обеспечивают (по согласованию с Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека) передачу материала в Референс-центры по мониторингу или лабораторной диагностике особо опасных вирусных инфекционных болезней (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора, ФГУ "48 ЦНИИ МО РФ"). Для проведения вирусологических исследований с целью выделения культуры вирусов III-IV группы патогенности - в Референс-центры, определенные приказом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 01.12.2017 N 1116 "О совершенствовании системы мониторинга, лабораторной диагностики инфекционных и паразитарных болезней и индикации ПБА в Российской Федерации". Транспортировку проб осуществляют в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

3.2. Основные принципы индикации и лабораторной диагностики

3.2.1. Основным принципом индикации и лабораторной диагностики является использование единой комплексной схемы анализа (приложение 2), предусматривающей на первом этапе последовательное выявление или исключение маркеров:

- вирусов I-II группы патогенности;

- бактерий I-II групп патогенности;

- микромицетов II группы патогенности;

- известных возбудителей инфекционных болезней, обусловливающих определенный синдром.

На втором этапе - выделение и идентификацию культур возбудителей неустановленного систематического положения.

3.2.2. Использование единых методов исследования при проведении индикации ПБА и лабораторной диагностики инфекционных болезней.

3.2.3. Принцип двухэтапного исследования материала (нативного и после биологического накопления) после исключения наличия маркеров вирусов I-II группы патогенности с использованием методов экспресс-анализа, ускоренной диагностики.

3.2.4. Использование единой схемы передачи информации о результатах индикации.

3.2.5. Использование для проведения лабораторных исследований диагностических препаратов, разрешенных к применению в установленном порядке, при их отсутствии коммерческие незарегистрированные препараты, экспериментальные производственные серии.

3.2.6. Целесообразно одновременное (параллельное) использование двух-трех методов (ПЦР и МФА; МФА и РНГА; МФА и ИФА и т.д.) для получения наиболее достоверных результатов.

3.2.7. При отсутствии возможности использования двух методов допускается подтверждение результатов индикации с использованием препаратов разных производителей (серий) или направленных на выявление различных мишеней.

3.3. Схема индикации и лабораторной диагностики

3.3.1. В соответствии с единой схемой индикации ПБА предусмотрены следующие этапы:

- прием, сортировка и регистрация проб;

- первичная обработка проб и подготовка их к исследованию;

- исследование проб нативного материала с помощью комплекса методов МФА, ПЦР, ИФА.

3.3.2. При обнаружении в исследуемом нативном материале маркеров вирусов I группы патогенности - ДНК/РНК, антигены, антитела класса М, дальнейшую работу с материалом прекращают. Все пробы упаковывают в строгом соответствии с требованиями в соответствии с действующими санитарно-эпидемиологическими правилами по порядку учета, хранения, передачи и транспортирования микроорганизмов I-IV групп патогенности.

3.3.3. Индикацию и идентификацию возбудителей опасных инфекционных болезней вирусной природы при исследовании проб клинического материала и объектов окружающей среды осуществляют с помощью следующих методов:

- экспресс-диагностика (МФА, ИХА);

- ускоренная диагностика (ПЦР, ИФА, серологические реакции);

- выделение вируса на чувствительной биологической модели (выделение вирусов I группы патогенности и неустановленного систематического положения проводят в учреждениях, имеющих разрешение на деятельность, связанную с накоплением возбудителей особо опасных вирусных инфекционных болезней (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор" Роспотребнадзора, ФГУ "48 ЦНИИ МО РФ").

3.3.3.1. При невозможности установления возбудителя заболевания с использованием существующих ПЦР тест-систем используют дополнительно электронную микроскопию и молекулярно-генетические методы (в том числе секвенирование отдельных фрагментов и полногеномное секвенирование).

3.3.3.2. Для выделения, идентификации возбудителя и определения его вирулентных свойств осуществляют заражение перевиваемых культур клеток (Vero, СПЭВ), РКЭ и биопробных животных (новорожденные белые мыши-сосунки).

3.3.3.3. При выделении вируса с неизвестными ранее свойствами и невозможности его систематизировать по результатам секвенирования (нуклеотидной последовательности генома) составляют паспорт штамма с указанием всех полученных характеристик.

3.3.4. При выявлении в материале генетических маркеров вирусов II-III группы патогенности (вирусов денге, желтой лихорадки и других флавивирусов, вируса лихорадки Рифт-Валли, ККГЛ, хантавирусов, вызывающих геморрагический синдром, и др.) аликвоты проб направляют по согласованию в Референс-центры по соответствующей нозологии для дальнейших вирусологических исследований.

3.3.5. При отсутствии в исследуемом материале маркеров вирусов I-II группы патогенности - ДНК/РНК, антигены, антитела класса М, проводят исследования с использованием бактериологического и биологического методов.

3.3.6. Биологическое накопление предусматривает посев исследуемого материала на питательные среды и заражение биопробных животных (возможно заражение биопробных животных с искусственно сниженной резистентностью).

3.3.7. С целью выделения культуры патогена проводят посев на комплекс питательных сред (дифференциально-диагностических и селективных).

3.3.8. После биологического обогащения проводят исследование проб методами МФА, ПЦР, ИФА, ИХА для детекции маркеров возбудителей инфекционных болезней бактериальной этиологии.

3.3.9. При необходимости осуществляют постановку биологической пробы на токсины - заражение белых мышей.

3.3.10. Идентификация выделенных культур:

- идентификацию культур возбудителей опасных бактериальных инфекционных болезней осуществляют в соответствии с нормативно-методическими документами для каждого вида возбудителя;

- идентификацию культур возбудителей неустановленного систематического положения осуществляют с использованием расширенного спектра методов, включая морфометрический, молекулярно-генетический, масс-спектрометрический и другие виды анализа;

идентификация выделенных вирусов проводится электронномикроскопическими, иммунологическими и молекулярно-генетическими методами.

3.3.11. При выделении культуры микроорганизма, предположительно являющегося этиологическим агентом Болезни или агентом при преднамеренном применении ПБА, определяют его чувствительность к антибактериальным препаратам, при необходимости проводят фрагментарное или полногеномное секвенирование.

3.4. Характеристика методов индикации и идентификации, используемых в лабораториях Центров индикации, Опорных баз Центров индикации и лабораториях МК СПЭБ

3.4.1. Обязательными методами индикации являются МФА, ПЦР, ИФА и РНГА.

МФА - сочетает иммунологическое и морфологическое исследование с люминесцентным анализом. МФА отличается высокой специфичностью. Чувствительность составляет 510 м.к./мл пробы. В лабораториях Центров индикации и их Опорных баз, в том числе лабораториях МК СПЭБ при проведении индикации используют прямой метод флуоресцирующих антител с контрастированием неспецифического свечения альбумином, меченным производными родамина. Непрямые модификации используются для идентификации культур возбудителей.

3.4.2. ПЦР - метод многократного избирательного копирования определенного участка ДНК при помощи ферментов в условиях in vitro. ПЦР позволяет детектировать фрагменты генома бактериальных, микотических и вирусных патогенных биологических агентов, в том числе с измененными фенотипическими свойствами, труднокультивируемые, некультивируемые и др. ПЦР отличает высокая чувствительность 110-110 м.к./мл и специфичность. Для проведения анализа с помощью данного подхода не требуется предварительное культивирование исследуемого материала.

Доступ к полной версии документа ограничен
Этот документ или информация о нем доступны в системах «Техэксперт» и «Кодекс».
Нужен полный текст и статус документов ГОСТ, СНИП, СП?
Попробуйте «Техэксперт: Лаборатория. Инспекция. Сертификация» бесплатно
Реклама. Рекламодатель: Акционерное общество "Информационная компания "Кодекс". 2VtzqvQZoVs